小鼠棕色脂肪前体细胞原代培养，怎样分离前体细胞

（转载，仅供参考）

(1)取BAT cell 的Isolationbuffer

按1：1000向其中加入p/s，4°C保存。

Notice:

用前按1~2mg/ml比例向Isolationbuffer中加入collagenase(c5138)，用滤器过滤消化液，并置于37°Cwater bath预热。

(2) Steps:先热上medium(培养用,分离用,消化用)

1）将新生Mice泡入70%EtoH 中约5mins进行消毒；(出生后两天内)

2）剪开其肩部中间的外皮，两个镊子拨开皮肤,弯头镊子夹取其BAT（位于肩胛骨间的蝴蝶状组织，尽量勿取到其他多余组织）移入含PBS的60-mmdishes中；

3）用PBS洗2~3遍；

4）将BAT组织挑出来,在不含液体的情况下剪碎为1mm2的小块

细碎的组织装进3ml含collagenase的Isolation buffer中；37°Cwater bath中消化30mins

5）30min后将消化液用力甩，以使附着的cell散落；液体越浑浊说明震荡下来的细胞越多。

6）用筛网将消化液过滤至15ml 离心管中，离心：200g，5min，弃上清；

7）用Isolationbuffer（不含collagenase）吹起离心管底沉淀，混匀，离心：200g，5min，弃上清；

8）用5ml 20%FBS-DMEM medium重悬cell，接于60-mmdishes中，培养，次日先用培养液清洗下再换液；

取过很多次了，只要小鼠是出生2天内的就不会有问题的~！

Cell的类型及用途

1、spare cell

备用cell，共流片时进行function eco和metal eco使用。

使用方法：

add_spare_cells

add_spare_cells -cell_name spare1 -lib_cell {AND2 OR2} -num_instances 250

2、level shifter

电平转换单元。该单元主要用于多电源多电压（MSMV）技术中，它通常不具备逻辑功能，只是用于不同电压值的Voltage Area之间的信号电平的转换。[2]

set_level_shifter shifter1_va1 指定level shifter的添加rule，相当于前缀名称

-domain VA1 指定Voltage Area

-applies_to input 指定level shifter在voltage area的input还是output

-source ss_top 指定supply set名字

-location parent 指定level shifter的放置位置，parent代表放在driver pin的父module

3、isolation cell [3]

通常用于电源关断技术（PSO）和多电源多电压技术（MSMV）。起到不同电压域之间的电压钳制和隔离作用。iso cell 有一个控制端 EN， 当 EN 无效时， A 端信号直接送到 Y 端，此时 iso cell 等效于一个buffer；当 EN 有效时，buffer 断开，Y 端保持固定的高电平或者低电平；上面这种 iso cell 有两组 power： primary power VDD 和 backup power VDDB，当 左边domain 关掉时， VDD off，此时就由 VDDB 供电，维持 Y 端的固定电平。

使用方法：

insert_mv_cells

4、filler cell

单元库中与逻辑无关的填充物，可以分为IO filler以及普通的standard cell filler。

(1)IO filler，也叫pad filler，通常用来填充IO单元与IO单元之间的空隙。为了更好的完成power ring，即ESD之间的电源连接。通常是在floorplan阶段添加。

使用方法：

create_io_filler_cells

create_io_filler_cells -reference_cells FILLER

(2)standard cell filler

为了填充std cell之间的空隙。主要是把扩散层连接起来满足DRC规则和设计需求，并形成power rails。在route前后添加都可以。

使用方法：

create_stdcell_fillers

create_stdcell_fillers -lib_cells {mylib/FILL_2X mylib/FILL_1X}

5、delay cell

延迟单元。常用于datapath，相比较与buffer，可以添加更多的delay，用来修复hold timing。

6、buffer cell

作用同delay cell，用来增加延时。相比较于delay cell，驱动能力更强，但是添加的delay更小。因此大的slack可以使用delay cell，较小的用buffer cell。

7、corner cell

boundary cell中的一种，which fill the empty space between horizental and vertical end-cap cells.

8、antenna cell

9、end-cap cell

end-cap cell are typically nonlogic cells such as a decoupling capacitor for the power rail.

原文链接：

常见公共场合英文标识

我们在公共场所经常会见到双语标识，但是这些标识的英译不规范现象比比皆是。下面整理了一些常见公共场合英文标识，希望对大家有所帮助!

1、开水间：Potable Water Room/Water Heater Room

2、茶水间：Tea room/Pantry

3、千手观音：Thousand-hand Bodhisattva

4、对公业务：Corporate Banking Services

5、禁止打手机：No Cellphone

6、总台：Information Desk/ Reception Desk

7、请勿入内：No Admittance

8、请勿摄像：No Filming

9、入口：Entrance

10、紧急出口：Emergency Exit

11、来宾登记：Registration

12、禁止吸烟：No Smoking

13、营业时间：Business Hours

14、游人止步：No Visitors

15、办公时间：Office Hours

16、禁止入内：No Entry

17、咖啡馆、小餐馆：Cafe

18、此路不通：Shut

19、此面向上：This Side Up

20、易碎：Fragile

21、小心烫伤：Caution Hot

22、小心地滑：Caution Slippery/Caution Wet Floor

23、小心玻璃：Caution Glass

24、小心台阶：Mind the Step

25、非公莫入：Staff Only

26、谢绝参观：No Admittance

27、严谨明火：No Open Flame

28、禁止拍照：No Photography

29、谨防扒窃：Beware of Pickpockets

30、排队等候：Please Line Up

31、随手关门：Keep Door Closed

32、节约用纸：Please Save Paper

33、儿童禁入：No Admittance For Children/Adults Only

34、贵宾通道：Vip Only

35、贵重物品，随身保管：Please Don’t Leave Your Valuables Unattended

36、自动门：Automatic Door

37、电源：Power Supply

38、结账稍后：Temporarily Closed

39、推：Push

40、拉：Pull

41、请勿乱扔杂物：No Littering

42、请勿触摸：Don’t Touch

43、保持肃静：Quiet Please

44、节约用水：Please Save Water

45、请勿坐靠：Please Stand Clear

46、小心碰头： Watch Your Head

47、敲击报警：Push For Alarm

48、熄灭烟头：Put Out Your Cigarettes

49、高压危险：Danger High Voltage

50、禁止堆放易燃物品：No Flammable Materials

51、通讯工具调至静音：Please Mute Cellphones

52、灭火器：Fire Extinguisher

53、消防栓：Fire Hydrant

54、紧急情况，敲碎玻璃：Break Glass in Emergency

55、阅览室：Reading Room

56、服务台：Service Desk

57、失物招领处：Lost and Found

58、禁止黄、赌、毒：Pornography

59、收款台：Cashier

60、洗手间：Toilet

61、爱护公共设施：Please Protect Public Facilities

62、欢迎光临：Welcome

63、油漆未干：Wet Paint

64、加油站：Filling Station

65、停车场：Parking

66、请勿践踏草坪：Please Keep off the Grass

67、安全疏散示意图：Evacuation Chart

68、留言栏：Suggestions

69、残疾人专用：Disabled Only

70、伸手出水：Automatic Tap

71、正在维修：Repairs in Progress

72、请勿随地吐痰：No Spitting

73、严禁携带易燃易爆等危险品：Dangerous Articles Prohibited

74、公共区：Public Area

75、贵宾区：VIP Area

76、观众席：Audience Area

77、老年人、残疾人优先：Priority for Seniors and Disabled

78、消防通道：Fire Engine Access

79、医务室：Clinic

80、自动扶梯：Escalator

81、疏散通道：Escape Route

82、补票处：Fare Adjustment

83、物品寄存：Luggage Deposit

84、始发站：Departure Station

85、终点站：Terminus

86、淡季时间：Low Season

87、旺季：High Season

88、故居：Former Residence

89、农家乐：Farm Stay/Agritainment

90、旅游纪念品：Souvenirs

91、桑拿：Sauna

92、新闻发布厅：Press Conference Hall

93、警务室：Guard Room

94、隔离门诊：Isolation Clinic

95、等候区：Waiting Room

96、易燃物品：Inflammable Materials

97、进口：Imported

98、吸烟区：Smoking Area

99、小心辐射：Caution Radiation

100、办公区：Administrative Area

Low Power概念介绍-Isolation Cell

今天要介绍的Low Power概念是 Isolation cell （隔离单元），通常用于电源关断技术（PSO）和多电源多电压技术（MSMV）。起到不同电压域之间的电压钳制和隔离作用。

为什么需要Isolation cell？看下面这图：

当左边的Voltage Area处于关断状态，右边的Voltage Area却始终处于开启状态，左边的PD关断使电路输出悬空，处于未知状态X，则PMOS管和NMOS管可能同时导通，造成器件短路。

通常Isolation cell和Level Shifter一起连用，AND和OR门都可以组成一个isolation cell。Isolation可以放在input端，output端或者第三方Voltage Area中，但是考虑到power-on rail的走线，isolation cell自身的功耗，一般还是放在input端比较好，因为放在input端不需要always-on的power。

结合图表来看UPF文件

set_isolation iso_va1 \ 指定isolation cell的添加rule，相当于前缀名称

       -domain VA1 \     指定添加isolation cell的voltage area

       -applies_to output \    指定isolation cell在 voltage area 的input还是output

       -diff_supply_only true\   指定cell port上是否允许有其他supply

       -loacation parent \     指定level shifter的放置位置，parent代表放在driver pin的父module

       -isolation_signal ip/iso_en1\   指定isolation cell的isolation 控制信号

      -calmp_value 1   指定isolation cell的输出值

set_isolation iso_va2 \

       -domain VA2\

       -applies_to output \

       -loacation parent \

       -sink ss_pd1 

       -isolation_signal iP/iso_en2\

       -clamp_value1

原文链接：;mid=2652112876idx=3sn=03e4161b9f9c8f7b7740ee7efe8e65a1chk**=f23a699fc54de089b8829af65f23b1a02470f81a3ef349fc272d9b678cfbcf0099c468b2ed78scene=21#wechat_redirect

#综述# 类器官在肿瘤研究中的进展和应用前景

摘要： 肿瘤是目前威胁人类健康的重要因素。靶向肿瘤的新药与肿瘤免疫新疗法的研发如火如荼，这些研究为攻克肿瘤带来了全新的希望。但受限于患者作为研究对象的不可操控性，而实验动物与人差异巨大，目前从基础到临床的转化效率极低，肿瘤类器官的兴起为转化医学提供了全新的技术平台。从最初单个肿瘤样本类器官的成功构建，到现在建立了大规模的肿瘤类器官库，肿瘤类器官研究已经成为肿瘤基础和临床研究中的重要工具，尤其在结合基因修饰技术的基础上，对揭示肿瘤发生发展的机制、快速评估肿瘤药物与免疫细胞的治疗效果意义重大。

关键词： 肿瘤；类器官；基因修饰；新药研发；免疫疗法；临床转化

抗生素和疫苗发现以前，传染性疾病曾肆虐全球，是人类健康的头号杀手。而现今，非传染性疾病已成为健康问题的主要影响因素，其中，肿瘤更是首要致死原因。最新统计学数据预测，2018年将有超过1800万新增肿瘤病例，960万肿瘤死亡病例[1]，肿瘤所造成的巨大经济、社会负担毋庸置疑。

人类与肿瘤的斗争历史源远流长。从希波克拉底时代开始，就有对肿瘤的描述性研究，包括其生长形态、表面溃烂的形成与否等等，肿瘤（carcinoma/carcinos）在希腊语是螃蟹（crab）的意思，由此，罗马医生将carcinoma/carcinos翻译为cancer，成为癌症的最初定义。近年来，随着理论和技术的飞速发展，包括“肿瘤是不可愈合的创口”、“种子与土壤学说”、“肿瘤免疫互作四部曲”、“肿瘤放射化学药物疗法”、“肿瘤免疫治疗”等，我们对肿瘤的认识日渐深入，部分肿瘤甚至已经有了完全治愈的方法。但目前对绝大多数肿瘤，我们一方面没有有效的预防和监测手段，另一方面可以选择的治疗策略极其有限。因此，对肿瘤的研究一直是生物医药领域的核心热点。有意思的是，每年肿瘤相关研究的学术论文发表量数以万计，绝大多数肿瘤在实验室已经得到了成百上千次治愈，但能真正转化到临床应用的治疗方案却极少。美国食品与药品监管局统计发现，临床前研究具有治疗作用的新药进入临床试验后，85%在早期就被证明没有效果，而那些成功通过三期临床试验的药物，只有一半能被FDA批准进入临床应用[2]。目前肿瘤新药研究的主要工具是体外培养的肿瘤细胞和啮齿类动物（主要是小鼠）上建立的肿瘤模型，但越来越多的证据表明，小鼠与人在疾病过程中的变化及其对药物的反应性存在一定的差异[3]。此外，小鼠模型通常只能模拟人类疾病的一个阶段，无法从病因、时间和进展速度等方面再现人肿瘤发生发展的全过程，在此基础上开发的肿瘤治疗方案，并不能预测其临床应用的有效性。更重要的是，实验小鼠基因背景、生长环境、致病因素和用药处理均非常单一，自然无法应对临床多种多样肿瘤病人的复杂情况。

动物模型的局限性促使人们转向直接研究肿瘤病人标本，常用的人源肿瘤模型包括人来源肿瘤细胞系培养和免疫缺陷动物人源肿瘤组织异种移植。肿瘤细胞培养的确提供了研究特定患者肿瘤细胞特性及其对药物敏感性的机会，但并非所有肿瘤均能成功体外扩增，另外，体外单一肿瘤细胞培养使其丧失了与肿瘤微环境中其他组分的相互作用，而肿瘤微环境对肿瘤的发生发展以及对药物的反应性决定至关重要。同样，人源肿瘤组织异种移植至免疫缺陷小鼠中也存在类似的问题，一方面移植成功率较低，另一方面免疫缺陷小鼠形成的肿瘤微环境与患者体内环境相差较大，可能导致肿瘤组织发生小鼠样进化[4]。

1 类器官在肿瘤研究中的发展

近年来，组织器官3D培养技术发展迅猛。2009年，Hans Clevers实验室将单个LGR5+小肠干细胞种植于含有R-spondin1、EGF、BMP抑制剂等干细胞维持因子的基质胶中，发现干细胞增殖分化，形成了具有增殖隐窝和高分化绒毛的类小肠结构[5]。随后，该实验室在小鼠小肠干细胞成类器官技术的基础上，进一步加入Wnt3A

nicotinamide、Alk抑制剂及p38抑制剂，实现了人结直肠肿瘤类器官培养[6]。同年，Eduard Batlle实验室分离出人大肠EPHB2高表达干细胞，并在体外3D培养中使单个细胞分化成为具有维持长期自我更新和多向分化潜能的大肠隐窝结构[7]。随后，包括前列腺[8, 9]、味蕾[10]、食管[11]、输卵管[12]、肝脏[13]、胰腺[14]、胃[15]、唾液腺[16]和乳腺[17]等在内的多个器官均成功在体外获得正常组织或肿瘤的类器官（图一）。由此可见，利用目前对肿瘤细胞和肿瘤微环境相互作用机制的认识，从肿瘤病人样本出发，通过加入多种细胞因子或小分子抑制剂，构建出患者特异性的肿瘤类器官，用于新药筛选和药物敏感性研究是可行的。

相比于传统2D培养和肿瘤组织异种移植，肿瘤类器官一方面构建成功率明显增高，且可长期低成本快速培养，便于基因修饰和大规模药物筛选等；另一方面，3D培养保留了肿瘤的组织特性，在研究过程中不会丢失肿瘤微环境的影响作用，为肿瘤药物研发提供更真实的环境。目前已经成功构建出包括结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、胃癌等在内多种组织的肿瘤类器官。常用的肿瘤类器官构建技术有两类，一种是通过诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）分化而来，另一种是直接来源于肿瘤组织。iPSCs来源的肿瘤类器官构建成功与否很大程度上依赖于肿瘤类型，操作更复杂，由此导致构建效率较低。此外，依靠iPSCs分化获得的肿瘤类器官也会丢失肿瘤微环境的复杂性。因此，直接通过肿瘤组织培养或干细胞分化，辅以细胞因子、肿瘤基质等补充，是肿瘤类器官研究的发展趋势。

肿瘤类器官对源肿瘤组织异质性的保存是类器官研究的核心基础。研究发现，肿瘤组织体外类器官培养可以获得大量不同特性的肿瘤类器官，单个类器官分析结果也表明同一肿瘤来源的类器官的异质性[18]。与此同时，组织化学分析发现肿瘤类器官内部即存在与源肿瘤相似的组织结构，通过原位DNA分析进一步证实类器官中同样存在源肿瘤相同的基因突变位点[18]。由此可见，肿瘤类器官在基因、转录、代谢、细胞和组织学上均较高水平地重现了其来源肿瘤的多样性和复杂性。更重要的是，体外培养过程对肿瘤类器官不会呈现明显均一化[19, 20]。但也有研究利用荧光标记不同突变体实验发现，大肠癌肿瘤类器官体外培养30-40天后，类器官会被某一种荧光标记的细胞主导，意味着培养过程中的确出现了特定突变体细胞优势生存的现象[21]。但这一现象并非体外类器官培养所独有，在体肿瘤中各类突变体也非均匀分布。由此说明肿瘤类器官确实在很大程度上模拟了在体肿瘤的各方面特性，是目前肿瘤基础研究和临床应用之间相互转换跨越的桥梁。

2 类器官在肿瘤发生发展机制研究中的应用

肿瘤的发生初始于细胞基因突变的累积，大量临床数据和实验室结果都显示正常个体内即存在大量的突变，且这些突变与年龄、生存环境、生活方式等均有一定的相关性，但并非所有的突变都会诱发肿瘤，不同组织对突变的耐受程度也不同。虽然已经有许多细胞和动物实验阐明从突变到肿瘤生成的关键因素和决定机制，由于无法监测和干预人体内肿瘤发展最初期的过程，目前对人体内肿瘤发生发展的认识还非常粗浅。类器官培养技术的兴起，为研究人体正常组织向肿瘤组织转变的过程提供了可能。

统计预测发现高达五分之一的肿瘤与感染相关[22]，虽然从感染到肿瘤的发展过程已有研究加以证明，但具体发生机制，尤其在人体内是如何进展的尚不明确。将病原体与健康组织类器官共培养，观察在感染情况下健康组织的突变起始和累积过程，评估感染作为肿瘤危险因子的相关性。如胃类器官可作为研究幽门螺旋杆菌在胃癌发生中作用机制的载体，精细观察幽门螺旋杆菌在胃上皮细胞的定植和克隆，及其对胃上皮细胞在基因、转录和蛋白水平的影响。结果显示在幽门螺杆菌注入能引起胃类器官发生强烈的炎症反应[23]，而慢性炎症与肿瘤发生有着密不可分的联系。此外，沙门氏杆菌与胆囊癌、人**状瘤病毒与宫颈癌、乙型肝炎病毒与肝癌等等，均可利用相应组织的类器官，研究病原体与宿主细胞之间的相互作用及致瘤机制。由于感染诱发肿瘤往往是一个长期慢性的过程，且伴随炎症的发生，因此，一方面类器官的长期稳定培养是前期基础，另一方面，在上皮细胞构建的类器官基础上，引入免疫系统和组织基质也是类器官应用的重要需求。

除了感染，肿瘤危险因素还包括年龄、家族史、物理化学诱变因素等，而这些因素诱导的突变累积是一个长期存在的过程。通过分析比较不同年龄供体来源、不同组织类器官中的突变体发现，体内的确以平均每年新增40个突变位点的速度在累积，且不同组织间突变模式相差较大，这可能是由于不同组织中细胞更新增殖水平相差较大，而细胞快速增殖过程中DNA**为基因突变创造了先决条件[24]。值得注意的是，同一组织不同个体间突变频率和范围差异均较小，在一定程度上解释了肿瘤发生与年龄的相关性[24]。但不同个体间肿瘤发生的类型、进展速度等各不相同，因此，突变频率和突变模式并非决定肿瘤发生发展的唯一因素，而在肿瘤已经发生之后，突变累积和筛选已经完成，无法追踪到最初始的突变特性。在类器官培养健康组织的基础上，利用各种诱变因子诱导健康组织向肿瘤转化，将极大地加速对肿瘤发生过程的研究。

不管是感染、物理化学诱变剂或是年龄增长导致肿瘤发生，最终都是由于基因突变发生和累加导致正常细胞癌变。因此，结合类器官培养和基因修饰技术可以快速建立肿瘤体外模型，研究肿瘤的发生发展过程。Drost实验室第一次在正常大肠类器官中通过CRISPR技术引入常见的大肠癌突变基因，如APC、TP53、KRAS和SMAD4，研究不同突变体在初始阶段对肿瘤发生的影响[25]。结果显示，突变后的肠类器官生长不依赖于肠干细胞生长维持因子EGF、WNT、R-spondin 1和noggin等，与此同时，他们还发现APC和TP53的突变是导致染色体不稳定和形成多倍体的关键因素[25]。将基因修饰后的肿瘤类器官皮下移植至免疫缺陷小鼠可以存活，但不会发生转移。而如果将上述诱导的肠癌类器官移植在小鼠盲肠，肿瘤会向肝脏和肺部转移[26, 27]。这一现象说明肿瘤转移需要特定组织微环境的支持，也提示虽然肠癌类器官的生长不依赖于肠干细胞维持因子，这些因子在肿瘤转移过程中必不可少。

肿瘤类器官以其特性模拟人肿瘤组织、可大规模长期稳定培养、容易基因修饰、处理因素可控和表型观察便捷的特性，成为肿瘤基础研究中替代人而又超越实验动物的有力工具。此外，肿瘤类器官作为体外培养体系，非常利于结合最新技术如基因修饰、单细胞分析、高分辨率电子/光学影像等联合应用，将突破肿瘤研究完全依赖于动物实验的时间、技术瓶颈。

3 类器官在肿瘤治疗策略研究的应用

肿瘤治疗是目前生物医学领域最大、最急迫的难题之一。一方面实验室研究越来越多，另一方面新药临床转化效率却依然低下。类器官培养为肿瘤药物快速有效研发提供了新的技术平台。有研究认为肿瘤类器官敏感的药物超过80%的可能性对应的肿瘤患者对该药也敏感，而在肿瘤类器官上无治疗效果的化疗药物对该肿瘤患者也无效。

随着类器官培养技术的迅速发展，越来越多的实验室和医院开始有意识地采集肿瘤类器官及其对应的健康组织类器官，并运用合适的冻存传代方法进行大规模保存，形成类器官库。根据患者信息、组织来源、基因表型等多个方面对类器官进行归类，使之成为公共的肿瘤研究资源，用于评测抗肿瘤药物的肿瘤杀伤效果和正常组织毒副作用。最早于2011年Masahiro Inoue实验室尝试大规模采集肿瘤组织体外成球培养保存[28]，但这一培养方法无法实现正常组织的长期保存。2015年，Hans Clevers团队第一次成功构建了20个结直肠癌患者来源的肿瘤与对应正常组织类器官库[18]。利用这些类器官样本，他们发现只有WNT 拮抗剂泛素连接酶RNF43突变的肿瘤类器官表现出对WNT分泌抑制剂的敏感性[18]。同时，结合类器官的突变表型和药物筛选，他们一方面验证了已知的突变体与特定药物的相关性，另一方面还发现了多个对肿瘤具有杀伤作用的化学药物。此外，由于正常组织类器官对照的存在，在验证药物肿瘤杀伤作用的同时，也能评估其对正常组织的毒副作用，最终选择出肿瘤杀伤强、毒副作用小的化疗药物用于临床。更重要的是，这一类器官库除了用于药物筛选，还被其他项目利用，从基因组和蛋白组学对不同个体肿瘤类器官与正常组织类器官进行对比分析[29]，实现对患者肿瘤状态的精准评估，为肿瘤的个性化治疗提供参考信息。目前已有包括结直肠癌、胰腺导管腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌等在内的多个组织肿瘤类器官库，尤其是结直肠癌与乳腺癌，类器官库中患者数目已达到上百个，为肿瘤新药大规模筛选和临床前研究奠定了基础。

借助于肿瘤类器官与对应健康组织类器官库的建立，同时基于肿瘤类器官对药物肿瘤杀伤效果预测的准确性，可以在制定肿瘤患者治疗策略前，一方面通过检测肿瘤类器官的突变体类型，确定可能起作用的候选药；另一方面利用肿瘤类器官对药物进行筛选，获得在类器官上对肿瘤有杀伤作用而对健康组织毒副作用较小的药物，应用于临床，真正实现肿瘤的个体化治疗。这一策略不仅适用于化疗药物的选择，更有利于免疫疗法的有效性评估。与化疗药物的普遍性杀伤不同，免疫疗法具有较高的特异性，更需要直接来源于患者的样本进行临床前检测。利用肿瘤类器官与免疫细胞共培养，可以快速有效地检测免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。研究发现特定T细胞亚群与乳腺癌肿瘤类器官共培养后，可以显著性杀伤三阴性乳腺癌细胞[30]。最近，Emile E. Voest实验室利用外周血单个核细胞与肺癌或结直肠癌肿瘤类器官共培养诱导出一群肿瘤特异性T细胞[31]。进一步研究发现这群肿瘤杀伤性T细胞不会攻击正常组织类器官[31]，说明通过肿瘤类器官中的新抗原表位获得杀伤细胞用于临床肿瘤个体化免疫治疗具有很好的应用潜能。

4 展望

类器官在肿瘤研究中的应用目前尚处于起步阶段，但不管是在基础研究还是临床转化，均获得了很好的研究成果。相对于肿瘤细胞系培养和小鼠异种移植，类器官具有培养成功率高、能快速获得大规模资源库、同时可以采集对应的正常组织对照、最接近患者真实信息等多个优势，但目前类器官培养也存在许多问题亟待解决。首先虽然类器官本身去除了异种移植鼠源进化的问题，但目前3D培养用的基质胶来源于小鼠，且一些类器官培养还需要加小牛血清等动物源物质，可能对细胞性质与药物筛选过程中的反应性有未知的影响。因此，无血清培养基、非动物来源基质胶等是目前类器官研究的重点之一。此外，利用成体干细胞培养获得的类器官成分依然比较单一，血管、基质和免疫系统均缺失，也有许多研究关注于类器官中肿瘤微环境的构建。最后，目前仅仅上皮细胞源肿瘤成功构建了类器官，而非上皮细胞类肿瘤如血液细胞肿瘤是否能进行类器官培养尚且未知。虽然类器官培养在肿瘤研究中还存在一定的问题，但这一技术的确搭建了从基础到临床转化的快速通道，为肿瘤新药研究和个体化治疗提供了新的平台。

参考文献

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